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產(chǎn)品中心

Product Center
M-MLV GIII 反轉(zhuǎn)錄酶(三代)
產(chǎn)品簡介

M-MLV GIII 反轉(zhuǎn)錄酶(三代)是通過基因修飾和重組技術(shù)獲得的第三代M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶。該酶相對于野生型M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶去除了RNase H活性,并大幅提高了熱穩(wěn)定性(the best反應(yīng)溫度為50℃),從而大大提高了合成first鏈cDNA時的特異性和長度(最長可達(dá)12 kb),增強了對RNA復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的耐受性。

產(chǎn)品型號:
更新時間:2026-01-07
廠商性質(zhì):代理商
訪問量:666
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品牌其他品牌貨號M5124
供貨周期現(xiàn)貨

貨號M5124

儲存條件-20℃

產(chǎn)品組成

組分規(guī)格

規(guī)格

M-MLVGIII Reverse Transcriptase(200U/ul)

50ul

5×M-MLV First Strand Buffer

500ul

0.1M DTT

100ul


產(chǎn)品簡介

M-MLV GIII Reverse Transcriptase是通過基因修飾和重組技術(shù)獲得的第三代M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶。該酶相對于野生型M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶去除了RNase H活性,并大幅提高了熱穩(wěn)定性(the best 反應(yīng)溫度為50℃),從而大大提高了合成first鏈cDNA時的特異性和長度(最長可達(dá)12 kb),增強了對RNA復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的耐受性。

酶活單位定義

37℃條件下,以Poly(A)-Oligo(dT)為模板/引物,在10 min內(nèi), 摻入1 nmol[3H] dTTP所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。

質(zhì)量控制

宿主原性DNA檢測

無宿主DNA污染

核酸內(nèi)切酶殘留檢測

將酶液與超螺旋質(zhì)粒DNA37℃溫育4h,通過DNA電泳檢測質(zhì)粒無變化。

核酸外切酶殘留檢測

將酶液與雙鏈DNA底物在37℃溫育16h,通過DNA電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。

使用方法

質(zhì)粒載體線性化與去磷酸化同步反應(yīng)流程

1. 于冰上配制如下反應(yīng)體系:


試劑

使用量

引物

X ul

Oligo(dT)20

終濃度2.5uM

或隨機引物

終濃度2.5ng/ul

或基因特異性引物

終濃度0.25uM

模板 RNAa

50 ng~1ug/20ul

5× M-MLV First Strand Buffer

4ul

0.1 M DTT

1ul

M-MLV GIII Reverse Transcriptase (200 U/ul)

1ul

dNTP Mix (10 mM Each)

1ul

(可選)RNase Inhibitor (40 U/ul)

1ul

Nuclease-Free Water

To 20ul


2. 輕柔吸打混勻后,瞬離;a. 推薦使用試劑盒提取的已去除基因組DNA污染的高質(zhì)量RNA作為模板。

3. 若使用Oligo(dT)20或基因特異性引物,50℃溫育30 min;若使用隨機引物,先25℃溫育5 min,之后50℃溫育30 min;

注:若目的cDNA小于3 kb,溫育時間可縮短為15 min。

4. 反應(yīng)結(jié)束后,85℃溫育5 min 以終止反應(yīng);

5. 將獲得的 cDNA 溶液置于冰上,用于后續(xù)實驗。

注:cDNA 溶液置于 -20℃可保存半年;置于 -80℃可長期儲存



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