貨號(hào)：T6035

存儲(chǔ)條件：-20℃，建議在首ci使用時(shí)分裝保存，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說明

TEV Protease (with His-tag) 來源于煙草蝕紋病毒，經(jīng)基因工程改造并在大腸桿菌中重組表達(dá)獲得，在保留天然TEV酶功能活性的同時(shí)，提高了其對(duì)pH和溫度的耐受性。TEV Protease是一種高度特異性的半胱an酸蛋白酶，常用于切除融合蛋白上的親和標(biāo)簽。TEV Protease 嚴(yán)格識(shí)別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，并在谷an酰胺和甘an酸/絲an酸之間進(jìn)行切割，常用的七an基酸序列是Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。TEV Protease (with His-tag) N端帶有His標(biāo)簽，使其可以在酶切完成后通過Ni親和層析去除，以達(dá)到純化目的蛋白的目的。

產(chǎn)品組分

活性定義

1 活性單位 (U) 定義為在1× TEV Buffer中，30℃反應(yīng)1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量。

儲(chǔ)存緩沖液

50 mM Tris-HCl；250 mM NaCl；10 mM DTT；1 mM EDTA；50% Glycerol；pH 7.5 @ 25℃。

質(zhì)量控制

蛋白純度

經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳檢測(cè)，蛋白純度不低于95%。

非特異性蛋白酶活性

30℃下，在50 μl反應(yīng)體系中將10 U TEV Protease (with His tag) 與 3 μg標(biāo)準(zhǔn)蛋白共同溫育1 h，通過SDS-PAGE檢測(cè)蛋白質(zhì)混合物未降解。

使用說明

1. 在 EP管中配制如下反應(yīng)體系：

2.  30℃孵育1 h或 4℃過夜（16 h左右）；

3.  向上述EP管中加入16 μl Protein Loading Buffer (SDS, 4×) (REF: G2526)，樣品煮沸10 min，取10 μl進(jìn)行SDS-PAGE分析；

4. 根據(jù)酶切結(jié)果，優(yōu)化TEV酶的用量、孵育溫度和孵育時(shí)間來確定最佳的反應(yīng)條件。

注意事項(xiàng)

1. 可兼容常見蛋白酶抑制劑，如：抑tai酶、苯甲脒、亮抑酶肽、胃蛋bai酶抑制劑、PMSF等。

2. 可兼容400 mM咪唑、2 M尿素、0.2 M NaCl、10 mM MgSO4、10 mM MnCl2、10 mM CaCl2和高達(dá)100 mM的 EDTA。

3. 該酶在有≥40%甘油、≥ 5 mM Zn2+、≥1 mM Cu2+和 ≥10 mM Co2+ 的反應(yīng)體系活性會(huì)受到抑制。

4. TEV 最佳反應(yīng)條件為pH7.0、30℃，但在pH6~9、4~37℃范圍內(nèi)均有活性，可根據(jù)目的蛋白的情況自行選擇適宜的反應(yīng)條件。